forrás: http://medpublics.com/docs/egy_novenyi_eredetu_vegyulet_english.pdf
2021-02-08 12:45:05
Háttér: Mivel a MAP kinázok (mitogén-aktivált protein kinázok) fontos útvonalai a sejtekben a külső ingerek belső jelekké történő átalakításának, annak meghatározása, hogy milyen lehetséges szerepük van a ráksejtekben, egy ígéretes módja lehet a rosszindulatú betegségek kezelésének és prognózisának. Korábbi kísérleteink szerint egy flavonoidban gazdag oldat, a Flavin 7, képes volt csökkenteni a vesetumor növekedését, in vivo. Anyagok és módszerek: A Flavin 7-nek az MAPK jelátviteli útvonalra gyakorolt hatásait immortalizált egér proximális tubuláris sejtekben, a sejt-életképesség áramlási citometriás elemzésével, luciferáz próbával, Western blotokkal határoztuk meg. Eredmények: Nem toxikus dózisban a Flavin 7 jelentősen csökkentette az ERK (extracelluláris szignálregulált kináz) foszforilációját és az ERK kináz MEK1 gátlásán keresztül gátolta az olyan lefelé irányuló célpontjainak (downstream targets) az aktivitását, mint az ELK1 és a CREB. Következtetés: Azon képessége miatt, hogy ideiglenesen gátolja a vesedaganat növekedését és a MEK1/ERK útvonal aktiválódását in vitro, további in vivo kutatások szükségesek annak meghatározására, hogy milyen potenciális szerepe van a Flavin 7-nek a rosszindulatú betegségek kezelésében. A mitogén-aktivált protein kináz (MAPK) kaszkád az egyik fő jelátviteli rendszer, amellyel a sejtek az extracelluláris jeleket intracelluláris válaszokká alakítják át. Ennek a kaszkádnak sok lépése konzerválódott és homológokat fedeztek fel különböző fajokban. Az első három emlős MAP kinázt, az ERK1-et, az ERK2-t és az ERK3-at az 1990-es évek elején klónozták, ami megkönnyítette a kutatásukhoz szükséges reagensek kifejlesztését. Egyértelművé vált, hogy az ERK1 és az ERK2 azon protein kinázok közé tartozik, amelyek a leggyakrabban aktiválódnak a jeltovábbító (szignál transzdukciós) útvonalakon. Elsősorban a sejtburjánzáshoz kötötték ezeket, sok más eseményben is fontos szerepük van. Az emlős sejtekben az ERK1 és az ERK2 – amelyekre gyakran hivatkoznak p44 és p42 MAP kinázokként is –, a MAPK család archetípusos tagjai. Ezért annak meghatározása, hogy a MAPK-ok milyen lehetséges szerepet töltenek be a ráksejtekben, egy ígéretes módszer lehet a rákos betegségek kezelésében és prognózisában. A legutóbbi eredmények szerint az ERK útvonalak aktiválódása gyakori esemény a tumorgenezisben. Az ERK jelen van a sejt iniciációban, a daganat promóciójában és fejlődésében, az invázióban, a metasztázisban, valamint a programozott sejthalál és az angiogenezis szabályozásában – amelyek események alapvetően szükségesek ahhoz, hogy áttétes daganat alakulhasson ki (áttekintése az 5. számú hivatkozásban). Másrészt, az ERK Egy növényi eredetű vegyület, a Flavin 7 hatása az ERK jelátviteli útvonalra az immortalizált egér proximális tubuláris sejtekben 2 aktiválódás nem egyértelműen kedvező vagy káros hatású a rákos betegek számára, mert kimutatták róla, hogy a sejtburjánzást és a túlélést a normál sejtekben, valamint a daganatos sejtekben egyaránt beindítja. A gyümölcs kivonatokban nagy mennyiségben megtalálható flavonoidok a daganatellenes hatásokat mutató szupernövények másodlagos metabolitjai. Tudott róluk, hogy antioxidáns és burjánzásgátló hatást gyakorolnak a daganatos sejtekre. A legújabb tanulmányokban azt taglalják, nem valószínű, hogy a flavonoidok klasszikus antioxidáns aktivitása lenne az egyetlen magyarázat a celluláris szinten kifejtett hatásukra. Ennek a hipotézisnek többféle érvelés is alapjául: l) a flavonoidok nagymértékben metabolizálódnak in vivo, így redox (redukciós-oxidációs) potenciáljuk lényegesen megváltozik és ll) a flavonoidok és metabolitjaik in vivo felgyülemlett koncentrációi alacsonyabbak, mint a kis antioxidáns tartalmú tápanyagoké. A vizsgálatok azt jelezték, hogy tirozin kináz aktivitást gátló képességüknek köszönhetően a flavonoidok szelektíven lépnek kölcsönhatásba a MAPK jelátviteli útvonallal. Egy természetes, hét különböző gyümölcs kivonatából álló vegyületet, a Flavin 7-et (F7) vizsgáltunk meg vesedaganat állatkísérletünkben. Ne/De daganat sejteket ültettünk be 6- 8 hetes Fischer 344 patkányok vese kapszulája alá, és az állatokat humán ekvivalensnek megfelelő F7 kivonattal kezeltük a gyártó utasításainak megfelelően. Két hetes kezelés után a patkányokat leöltük, és meghatároztuk a daganatnövekedést. Az F7 jelentősen (p <0.05) csökkentette a daganatnövekedést in vivo. A kutatás célja annak meghatározása volt, hogy az F7 hatással van-e az ERK jeladó útvonalra az immortalizált egér proximális tubuláris sejtekben.
forrás: http://medpublics.com/docs/HUchoquenet2008.pdf
2017-07-11 10:33:40
Benjamin Choquenet, Céline Couteau, Eva Paparis, and Laurence J. M. Coiffard*
Faculty of Pharmacy, UniVersité de Nantes, Nantes Atlantique UniVersités, LPiC, SMAB, EA2160, 1 Rue G. Veil–BP 53508,
Nantes, F-44000 France
Beérkezett: December 18, 2007
Mivel a flavonoidokról köztudott, hogy fényvédő (UV)B tulajdonságokkal rendelkeznek olyan növényekben, amelyek tartalmazzák őket, tanulmányozás céljára kiválasztottuk a kvercetint (1) és a rutint (2) mint olyan hatóanyagokat, amelyeket lehetséges volna alkalmazni fényvédő készítményekben. Erről a két hatóanyagról bebizonyosodott, hogy hasonlóképpen viselkednek. Amikor beépítettük őket vízben-olaj emulziókba 10% (w/ w) koncentrációban 1 és 2 hasonló napvédő faktor (SPF) étékeket mutatott, mint a homoszalát, amely egy standard vegyület. Ez a két flavonoid egy el nem hanyagolható szintű fényvédő hatást is biztosított az UVA skálán is. Amikor titándioxiddal kombinálva alkalmaztuk, az elért SPF 30 körül volt.
Az ultraibolya sugárzásnak való túlzott kitettség bőrkárosodást okozhat. Ez lehet azonnali és hosszú távú, olyan hatásokkal, amelyek a leégéstől a korai ráncosodásig, illetve a rák kialakulásáig terjedhetnek. 1-3
A fényvédőket lehet alkalmazni éveken át is a sugárzásnak kitett területeken, hogy megvédjük a bőrt az ultraibolya fény károsító hatásaitól. Habár a fényvédő krémek alapvetően fontosak, egyeseknek mégis vannak olyan káros hatásaik, mint például az ösztrogén tevékenység 4,5 valamint a fényallergia. 6 Éppen ezért a jelen tanulmányt azért végeztük el, hogy teszteljük azt a feltételezést, hogy a kvercetin vagy 32,4-dihidroxi-flavonol (1) és a rutin vagy kvercetin-3- O-_-rutinozid (2) rendelkezhetnek-e lehetséges fényvédő tevékenységgel. A flavonoidok egy olyan jelentős természetes vegyületosztályt alkotnak, amelyeket antioxidáns, 7,8, maláriaellenes, 9, gyulladásgátló, 10 és baktériumölő tevékenységükről ismerünk nagyon jól.
Ennek a kísérletnek az volt a célja, hogy egy in vitro módszer keretében felderítse az 1 és 2 tulajdonságait, valamint hogy meghatározza ezek hatásait a szervetlen UV-szűrőkkel összefüggésben, és mindkettőjük napvédő faktorának (SPF) tekintetében továbbá az UVA (PF-UVA) védő faktor értékeiket a helyileg alkalmazott napvédő készítményekben. Az 1 és 2 vegyületekben mért spektrumok a jelen kísérletben nagyon hasonlóak voltak, és 373, illetve 341 nm felszívódási csúcsokat nyújtottak. Mindegyik vegyület tekintetében tanulmányoztuk a hatékonysági koncentrációs hatást az UVB, illetve UVA skálán (1. ábra).
Ha összehasonlítjuk az 1 és 2 –t azokkal az UVB szűrőkkel, amelyeket jelenleg engedélyeznek az Európai Unióban, meg lehet állapítani, hogy amikor 10 %-os (w/w) koncentrációban alkalmazzák őket, a kilencedik helyezést érik el a sorban (9/18), egy olyan hatékonysággal, amely a kinyert homoszalát hatékonyságához mérhető (ez egy olyan referencia szűrő, amelyet az FDA standardok meghatározásához alkalmaznak). Amíg az UVA elleni hatékonyságuk vonatkozásában mindkettő érdeklődést kelthet (7-ből 5-ig rangsorolt szűrőként engedélyezettek), ugyanakkor mindannyian hasonló szintű védelmet nyújtanak úgy az UVB, mint az UVA ellen, az SPF/PF-UVA arányt 3-nál kevesebbé teszik. Ezek az eredmények megerősítik, hogy a flavonoidok használatának vonzerejét fényvédő hatóanyagokként a növényekben. 12 2 órányi 650 W/m2 sugárzás után 1 és 2 egyaránt fénystabilnak mutatkozott. Valójában az 1 és 2 alapú napvédő termék hatékonyságának több mint 90 %-át megőrizte (1. táblázat). Abból a célból, hogy olyan napvédő termékeket alakítsunk ki, amelyek nem tartalmaznak szabályozott szerves szűrőket, különféle kombinációkat kiviteleztünk.
A kombinációk három sorozatát úgy készítettük el, hogy ugyanolyan százalékos arányban alkalmaztuk az összetevőket, (10% w/w): először csak flavonoidokat, majd ezek kombinációját titándioxiddal, és végül cinkoxiddal. Ezzel a módszerrel mindegyik kombinációt kiegészítő hatásúvá, szinergikussá/kölcsönhatásúvá vagy nem-kompatibilissá/ alkalmatlanná tettük. A 2. táblázat megmutatja, hogy az 1 és 2 kombinációjából eredő kölcsönhatást értük el úgy az UVB, mint az UVA területén.
Az 1 kombinációja titándioxiddal is kölcsönhatásszerű lett (2. táblázat). Ez az eredetileg 30-as fényvédő hatású terméket, mely (SPF/PF-UVA arány az 1.81-ből) volt, jó védőhatásúvá tette az UV teljes skáláján, amely valószínűleg nemkívánatos hatásokat okozott volna. Hasonlóképpen a 2 kombinációja titándioxiddal érdekes eredményeket mutatott (2. táblázat). A cinkdioxiddal elvégzett kombináció tisztán additív hatásokat mutatott (2. táblázat). Habár az elért SPF értékek (10 az 1 esetében és 11 a 2-nél) csupán mérsékelt szintű napvédelmet nyújtottak. Mivel a terméket napvédő hatására nézve csak 15-ös értékűnek ítéltük meg hatékonyságát tekintve, ezeket a kombinációkat nem találtuk érdemesnek további vizsgálatokra, hiszen a cinkoxid használata egyébként is sokkal nehezebb, mint a titándioxidé.
Kísérleti részleg
Általános kísérleti eljárások.
A vizes oldatokat 200 és 400 nm hullámhosszon figyeltük meg egy kettős sugarú spektrofotométer (Hitachi UV–látható, U-2000 modell) használatával. A spektrumokat egy tiszta vízminta ellen mértük kvarc cellákban 1 cm-es optikai ösvényhosszon.
Vegyszerek.
A kvercetint (1) és a rutint (2) Fisher Bioblock (Illkirch, Germany). Dimethicone (Abil WE 09)-ből nyertük ki. A dimetikont Goldschmidt (Montigny-le-Bretonneux, France)-ból nyertük ki. A cetiol HE-t, sztearinsavat, a glicerint, a parabéneket és a trietanol-amint (TEA) a Coopertől (Melun, Franciaország) vásároltuk. A xantán gumit (Keltrol BT) a Kelco cégtől (Lille Skensved, Dánia) szereztük be. A Tayca MT-100TV-t (titándioxidot, alumínum-hidroxidot, sztearinsavat) és a Z-Cote Maxot (cinkoxid, difenil kapril metikont) az Unipextől (St. Ouen l’Aumône, Franciaország) illetve BASF-től (Levallois Perret, Franciaország) szereztük be.
A napvédő anyagok hatékonyságának meghatározása. Egy o/w emulziót készítettünk el laboratóriumban, hozzáadva azon ismert vegyületek koncentrációját, amelyeket a készítmény vegyületeire nézve teszteltünk. A készítménynek egy részletes leírását meg lehet találni az előző számban. 13 Az 1 és 2 vegyületek különféle koncentrációját építettük be egyedül a TiO2 vagy ZnO társításával a krémekbe. Majd miután a termék 30 mg-ját pontosan kimértük, egy cot bevonatú ujjal rákentük (25 cm2) egy PMMA lap teljes felületére (25 cm2) (Helioscience, Creil, Franciaország). Miután felkentük, 15 mg rajta maradt a cot ujjon. A krémek PFUVA értékeit aztán in vitro mértük. Három lemezt preparáltunk minden egyes termék számára tesztelés céljára, és minden egyes lemezen kilenc mérést végeztünk el. Átviteli méréseket 290 és 400 nm között, valamint 320 és 400 nm között SPF-re és PF-UVA-ra végeztünk el egy spektrofotométer segítségével, amely el volt látva egy integrációs gömbbel (UV átviteli analizáló UV1000S Labsphere, North Sutton, NH). A számításokat a következő egyenleteknek megfelelően végeztük el:
SPF)Ó
290
400
EλIλΔλ⁄Ó
290
400
EλIλTλΔλ (1)
PF-UVA)Ó
290
400
EλIλΔλ⁄Ó
290
400
EλIλTλΔλ (2)
amelyben az Eλ a földi napfény spektrális sugárzása λ –nál. Az Iλ az eritemális tevékenység spektruma λ–nál, a Tλ pedig a mintaanyag spektrális átvitele λ-nál. 14,15 A lemezeket két órán át sugározták be napszimulátor készülékkel (Suntest CPS; Atlas, Moussy le Neuf, Franciaország), amely el volt látva xenon ívlámpával (1500 W), valamint speciális üvegszűrőkkel, amelyek korlátozták a fény átvitelét 290 nm fölött. A fényforrás kibocsátását fenntartottuk 650 W/m2-en, ami egybeesik az általános napspektrum kisugárzással. 16 A besugárzás alatt és után a krémek SPF és PFUVA adatait in vitro mértük meg.
1. ábra Az 1 és 2 vegyületek hatása az SPF-re és a PF-UVA-ra.
1. táblázat Az 1 és 2 fénystabilitása
1 vegyület (átlagosan) (±SD), 2 vegyület (átlagosan) (±SD)
SPF(t0) 4.52 ( 0.38 4.72 ( 0.20
SPF (t120′) 5.64 ( 0.46 4.42 ( 0.13
PF-UVA (t0) 5.77 ( 0.55 4.92 ( 0.20
PF-UVA (t120′) 6.15 ( 0.58 4.59 ( 0.13
forrás: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=PMC4812277
2017-03-14 10:44:16
Az Adansonia digitata L. (Malvaceae – mályvafélék családja) gyümölcshús metanolos kivonatát tanulmányoztuk annak májvédő hatására nézve acetaminophennel kiváltott károsodás ellen patkányokban. Az alapelv attól függ, hogy az acetaminophen adagolása öszefüggésben van-e az oxidatív stressz kialakulásával. Ezen kívül, hogy a májspecifikus szérum markerek zavart szenvednek-e. A patkányok kezelése az Adansonia digitata L. metanolos gyümölcshús kivonatával az acetaminophen adagolása előtt jelentősen csökkentette a májfunkció zavarait. A májfunkciókat a teljes protein, teljes bilirubin, ALP, ALT és AST értékelésével mértük. Ezen kívül értékeltük az oxidatív stressz paramétereit és az antioxidáns markereket is. Sőt sejtpatológiai kiértékelést is végeztünk azért, hogy felbecsülhessük a máj esetében a gyulladáskeltő átszivárgást vagy nekrózist. Az állatokat megfigyelés alatt tartottuk, vannak-e bármilyen mérgezettségi szimptómáik az Adansonia digitata L. gyümölcspép adagolását követően, hogy biztosíthassuk a gyümölcskivonat biztonságosságát.
1. Bevezetés
A modern ételdivatok, a túlzott gyógyszerfogyasztás és a szennyező anyagoknak való kitettség, sok más egyéb faktor mellett sokféle súlyos megbetegedéshez kell, hogy vezessenek, beleértve a májkárosodást is. [1]. A reaktív oxigénfajták termelését olyan döntő faktornak tekintik, amely a szövetek oxidatív károsodásához vezet. Ezek reakcióba lépnek a sejthártyával: ennek megfelelően sok klinikai betegséget ezeknek a szabadgyököknek lehet tulajdonítani. [2]. Az utóbbi időben gyógynövénytermékek kaptak figyelmet az alternatív gyógyászat részeiként. [3, 4]. Arról számoltak be, hogy a lakosság jelentős része természetes gyógykészítmények függőségében él, hogy fenntarthassa az egészségét vagy hogy kezelhesse a betegségeit. [5]. Manapság úgy tűnik, hogy ezeknek az újfajta drogtípusoknak a felfedezése oda vezetett, hogy a növényi eredetűekre összpontosítanak. A növényi gyógykészítmények jelentős szerepet játszanak a májsejtek regenerációjában és a gyógyulási folyamatok felgyorsításában, ennélfogva sok májbetegség kezelésében [2]. Az egyik ilyen általános példa a Silybum marianumból kivont szilimarin. A szilimarin egy fenolvegyületekből (flavonolignánsokból) álló keverék, melyet jól ismernek szabadgyökfaló tevékenységéről, ami ezért fontos szerepet játszik az oxidatív károsodás megelőzési kezelésében, amely károsodást a reaktív oxigénfajták váltanak ki. Manapság a szilimarint úgy tekintik, mint sok jelentős gyógyszerészeti készítmény fő komponensét a piacon, melyet azért vezettek be, hogy kezeljék vele a májbetegségeket [2, 6, 7]. Arra a tényre alapozva, hogy a növények félelmetes számban tekinthetők valóságos aranybányának a májvédő hatóanyagok felfedezésére, egy kutatási tanulmányba kezdtünk, hogy felderítsük az Adansonia digitata L. gyümölcshús adottságait.
A célunk itt most az, hogy felfedezzük azokat a természetes eredetű gyógyászati hatóanyagokat, amelyeknek májvédő hatása van. A munkánk az Adansonia digitata L. –re fog fókuszálni, (melyet közönségesen csak baobabként ismernek); ez egy Közép-Afrikában honos fa, mely a mályvafélék családjába tartozik. A baobab gyümölcshúsa igen jelentős élelmiszer. Úgy használják, hogy feloldják tejben vagy vízben. Ezt az oldatot italként használják, vagy sütéshez, vagy szószként ételekhez. A gyümölcshúst népszerű anyagnak tekintik jeges termékekben alkalmazva [8].Korábbi kémiai kutatások arról számoltak be, hogy az Adansonia digitata L flavonoidokat, terpéneket, szteroidokat, aminosavakat, vitaminokat. zsiradékokat és szénhidrátokat halmoz fel magában [9].
A száraz gyümölcshús magas százalékban tartalmaz szénhidrátokat, tiamint, nikotinsavat és C-vitamint: ezenkívül igen erős szabadgyök-faló tevékenységet is fejt ki [8, 10, 11]. Korábbi beszámolók azt is jelezték, hogy a gyümölcshús-kivonat számos olyan tevékenységet is kifejtett, mint a gyulladáscsökkentés, fájdalomcsillapítás és lázcsillapítás [12]. Mivel a szabadgyök-faló és lázcsillapító hatás döntően fontos faktorok a májkárosodások kezelésében, ezért ez a növény javasolható, mint hatékony májvédő, az általa tartalmazott hatóanyag miatt. Kísérletünk során a gyümölcskivonatot teszteltük patkányokban acetaminophen adagolásával kiváltott májkárosodás elleni májvédő hatóanyagként. A májfunkció mérését annak specifikus szérum markerének, valamint az oxidatív stressznek a meghatározásával végeztük. A tanulmányt alátámasztják a sejtpatológiai kísérletek is, amelyek bármely nekrózisos, gyulladásos vagy átszivárgási jelenség észlelésére irányultak.
2. Anyagok és módszerek
2.1. Állatok
Hetven felnőtt hím Wistar patkányt, egyenként 200-250 g testsúlyúakat, használtunk fel a jelenlegi tanulmányban. A patkányok szabadon fértek hozzá az élelemhez és a vízhez. 12 órán át tartottuk őket világossági, 12 órát pedig sötétségi ciklusban a kísérlet ideje alatt, és megengedtük, hogy akklimatizálódjanak egy héten keresztül, mielőtt elkezdtük volna a kísérletet. Az állatkísérleteket jóváhagyta a National Committee of Biomedical Ethics (Országos Biomedikai Etikai Bizottság, a King Abdulaziz Egyetem, Jeddah, Szaúd-Arábia (referenciaszám: 163-15).
2.2 Drogok
Az acetaminophent és a szilimarint Sigmából, Egyiptomból szereztük be. A szilimarint szájon keresztül adagoltuk naponta egyszer egy héten keresztül gyomorszondán át 100 mg/kg adagban [13]. Az Adansonia digitata kivonatot (200 mg/kg) naponta egyszer adagoltuk szájon át egy héten keresztül. A drogokat és a kivonatot desztillált vizes szuszpenzióban tartottuk.
2.3. Növényi anyag és kivonat
A gyümölcsöket Szudánban gyűjtötték be és a King Abulaziz Egyetem Tudományos Karán azonosították, egy igazoló elismervényt letétbe helyeztek a King Abdulaziz Egyetem Alternatív Gyógyászati Fakultásán, a Gógyszerészeti Karon Jeddahban, Szaúd-Arábiában, az AD-2014 regisztrációs szám alatt. A gyümölcshúst metanollal vonták ki (3 × 2000 mL) macerálással szobahőmérsékleten. A kombinált metanolos kivonatot koncentráltuk csökkentett nyomás alatt, majd hűtőgépben tartottuk a felhasználásig.
2.4. Heveny mérgezettség a patkányokban
Az Adansonia digitata kivonat heveny mérgezésének teszteléséhez patkányokat használtunk, mindegyikhez hatot. Az Adansonia digitata kivonatot desztillált vízben szuszpendáltuk és naponta egyszer adagoltuk egy héten keresztül négy különféle dózisban. (200, 500, 1000, illetve 2000 mg/kg). Hat egér volt kontroll egyed. Az első órában a patkányokat folyamatosan megfigyeltük, majd 12 órán át óránként, hogy észlelhessük a mérgezettségi jeleket, illetve az elhalálozás jeleit.
2.5. Acetaminophen által kiváltott heveny májtoxicitás
Acetaminophennel váltottunk ki heveny májtoxicitást (2 g/kg) szájon keresztül az ötödik napon, 30 perces utókezeléssel [13, 14].
2.6. Kísérleti terv
Negyven patkányt osztottunk szét négy csoportba, minden egyes csoportba tíz állat került (n = 10), és orálisan kezeltük őket az alábbiak szerint:
-
I. csoport (normális): normális kontroll patkányokként használtuk őket, ezek desztillált vizet kaptak szájon keresztül hét napon át.
-
II. csoport (acetaminophen): a patkányok desztillált vizet kaptak szájon keresztül hét napon át; az ötödik napon a patkányok acetaminophent kaptak szájon át adagolva.
-
III. csoport (acetaminophen + szilimarin): a patkányok szilimarint kaptak (100 mg/kg) szájon keresztül hét napon át; az ötödik napon a patkányok orális adagokban kaptak acetaminophent.
-
IV. csoport (acetaminophen + kivonat): a patkányok a kivonatot kapták (200 mg/kg) szájon keresztül naponta hét napon át; az ötödik napon a patkányok acetaminophen adagot kaptak orálisan.
A hetedik napon, két órával a kezelések után [14] vérmintát vettek retroorbitális sinus plexuson keresztül, majd a patkányokat feláldozták. A vért hagyták megalvadni szobahőmérsékleten, majd a szérumot centrifugálással nyerték ki 4000 rpm-en 15 percen keresztül, utána −20°C-on tartották további biokémiai elemzések céljára. Két adag májszövetet vettek ki. Az első mintaadagot azonnal −80°C-ra hűtötték le, amíg fel nem használták különféle biokémiai mérésekhez, a második adagot viszont beágyazták 10%-os formalinba, majd feldolgozták szövetpatológiai kísérlethez. A májszövet metszeteket hematoxilinnel és eozinnal színezték (H&E).
2.7. A májfunkció mérése
A májfunkció kiértékeléséhez alanin-amino-transzaminázt (ALT), aszpartát-amino-transzaminázt (AST), alkalin-foszfatázt (ALP) és teljes bilirubint mértünk spektrometriásan a kereskedelmi BioMed Diagnosztikai (White City, OR, USA) felszerelés használatával. A teljes proteint mértük kolorimetriás módszerrel, egy Diamond C Diagnosztikai felszerelés használatával (Kairo, Egyiptom), követve a gyártó használati protokollját.
2.8. A lipid-peroxid mérése (MDA-val mérve)
Az MDA-t úgy határoztuk meg a máj homogenizátumokban spektrometriásan, mint a tio-barbiturátsav reaktív anyagait (TBARS) ) [15].
2.9. A glutation (GSH) mérése
A GSH szintet a máj homogenizátumokban Ellman módszerének követésével határoztuk meg [16].
2.10. A szuperoxid diszmutáz (SOD) mérése
A SOD aktivitást Marklund módszerének megfelelően mértük [17].
2.11. A kataláz tevékenyéség (CATA) mérése
A kataláz tevékenységet a máj homogenizátumban spektrometriásan mértük CATA mérőfelszerelés segítségével (Bio-Diagnostic, Egyiptom) Aebi 1984-es leírásának megfelelően [18].
2.12. Statisztikai elemzés
A kinyert adatokat úgy ábrázoltuk, mint átlagos ± standard eltérés (SD)-t. A csoportok közötti összehasonlítást egyirányú variációs (ANOVA) elemzésként használtuk, melyet Bonferroni többszörös összehasonlítási tesztjének követésével alkalmaztunk [19]. Minden P értéket kétfarkú (kétoldalú) értékként jegyeztek fel. P < 0.05-et statisztikailag jelentősnek ítéltük meg. Az adatokat a Statistical Package of Social Sciences (SPSS)-ként elemezték (Társadalomtudományok Statisztikai Csomagja .- M.M.), 16-os program verzió.
3. Eredmények
3.1. Heveny toxicitási kísérlet
Az Adansonia digitata kivonat hét napi alkalmazása után nem jelentettek elhalálozást 2000 mg/kg-ig, és ezért a maximális adag egytizedének adagolását (pl. 200 mg/kg, p.o.) választották ennek a kísérletnek a lefolytatásához.
3.2. Az Adansonia digitata kivonat és a szilimarin hatása a májfunkcióra, ALT, AST, ALP, bilirubin és teljes protein mérésével
A májfunkció tesztek eredményeit az 1. táblázat mutatja. Az acetaminophen alkalmazása jelentős emelkedést eredményezett a májspecifikus ALT, AST, ALP és teljes bilirubin szérum markerek megemelkedésében. Másrészt jelentős csökkenés mutatkozott a teljes proteinben, a normális kontroll patkányok értékeivel összehasonlítva. Az acetaminophennek ezek az ártalmas hatásai jelentősek voltak (P < 0.05), melyeket enyhített az előzetes kezelés szilimarinnal, vagy pedig Adansonia digitata kivonattal, összevetve az acetaminophen csoport eredményeivel. Nem találtunk jelentős különbséget a szilimarinnal kezelt patkányok és az Adansonia digitata kivonattal kezelt patkányok között (1. táblázat).
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4812277/table/tab1/
1. táblázat
Az Adansonia digitata kivonat hatása a szérum májenzimekre (ALT, AST és ALP), a teljes bilirubinra és a teljes proteinre az acetaminophennel kiváltott májkárosodást szenvedett patkányokban.
3.3. Az Adansonia digitata kivonat és a szilimarin hatása az acetaminophennel kiváltot májelváltozásokra, MDA, GSH, SOD és CAT tevékenységek
Az acetaminophennel kiváltott oxidatív stressz a májban jelentősen megemelkedett MDA szint (P < 0.05) formájában volt jelen, összefüggésben a jelentős SOD, GSH tevékenység csökkenésével (P < 0.05) és a CATA szintekével, összehasonlítva a normális állatokéval (111–4ábrák). Ezek a kártékony eredmények, melyeket az acetaminophen alkalmazása váltott ki, jelentősen javultak (P < 0.05), mikor az állatokat vagy szilimarinnal kezelték, vagy Adansonia digitata kivonattal, összehasonlítva az acetaminophen csoporttal. Nem volt jelentős különbség a szlimarin és az Adansonia digitata kivonattal kezelt csoport között, ami azt sugallja, hogy az Adansonia digitata kivonatnak ugyanolyan jótékony/gyógyító hatása van, mint a standard referencia drogként alkalmazott szilimarinnak (11–4 ábrák).
http://medpublics.com/images/study58/1.jpg
Az Adansonia digitata kivonat (200 mg/kg) és a szilimarin (100 mg/kg) hatása a máj lipid-peroxid koncentrációira (MDA-val mérve) az acetaminophennel kiváltott májmérgezettség esetén patkányokban. Minden egyes pont a tíz patkány átlagos ± SD-jét ábrázolja…
http://medpublics.com/images/study58/2.jpg
Az Adansonia digitata kivonat (200 mg/kg) és a szilimarin (100 mg/kg) hatása a glutation (GSH) szintre az acetaminophen által kiváltott májmérgezettség esetén patkányokban. Minden egyes pont a tíz patkány átlag ± SD-jét ábrázolja. „Jelentős…
http://medpublics.com/images/study58/3.jpg
Az Adansonia digitata kivonat (200 mg/kg) és a szilimarin (100 mg/kg) hatása a szuperoxid diszmutáz (SOD) tevékenységre az acetaminophen által kiváltott májmérgezettség esetén patkányokban. Minden egyes pont a tíz patkány átlag ± SD-jét ábrázolja. „Jelentős…
http://medpublics.com/images/study58/4.jpg
Az Adansonia digitata kivonat (200 mg/kg) és a szilimarin (100 mg/kg)hatása a máj kataláz (CATA) tevékenységre, melyet az acetaminophen által kiváltott májtoxicitást szevedett patkányokban mértek. Minden egyes pont a tíz patkány átlag ± SD-jét ábrázolja. „Jelentős…
3.4. Szövetpatológiai mikroszkópos tanulmány
A májszövetek szövetpatológiai tanulmányai feltárták, hogy sem a nekrózis, sem a gyulladás nem volt jelezhető a normál kontroll állatokban, ami azt mutatta, hogy normális hisztológiai struktúra van jelen a májsejtek teljességével egységben (5(a) ábra) Másrészt az acetaminophennel kezelt csoportnál a májsejtek nekrózisa volt kimutatható, gyulladás, valamint limfocita-átszivárgás (5(b) ábra). A szilimarinnal való előzetes kezelés megközelítőleg normális májstruktúrát mutatott ki (5(c) ábra). Az Adansonia digitata kivonattal való előzetes kezelés a májsejtek parenchyma (sejtszövet, működő szövet) megtartást mutatott enyhe nekrózissal és gyulladással (5(d) ábra).
http://medpublics.com/images/study58/5.jpg
A patkányok acetaminophennel, szilimarinnal és Adansonia digitata kivonattal kezelt csoportjainak szövetpatológiai tanulmánya. (a) A kontrollcsoport normális májszerkezetet mutatott (H&E ×40). (b) Az acetaminophennel kezelt csoport májsejtjei markánsan megmutatkoztak…
Go to:
4. Vitaanyag
A máj egy nagy szerv, mely felelős az anyagcseréért, a méregtelenítésért és a fehérjeszintézisért [20, 21]. Világszerte a drogok által kiváltott májmérgezettség az egyik legfőbb oka az emberi halandóságnak [22]. Számos kutató az acetaminophen által kiváltott mérgezésekkel szembeni védekezést tesztelte a lehetséges májvédő hatóanyagokkal [23–26].
Az acetaminophen egy közönséges fájdalomcsillapító-lázcsillapító drog. Gyógyászati adagokban biztonságos. Sok kísérlet kimutatta már, hogy a nagy dózisú acetaminophen a májsejtek elhalását váltja ki az állatokban [2]. Az acetaminophen magas dózisa után széleskörűen átalakul az anyagcsere folyamán N-acetil-p-benzokvinoneiminné (NAPQI), ami kiüríti a GSH-t és májmérgezettséghez vezet [13, 14]. Az acetaminophenről azt is kimutatták, hogy közvetlenül gátolja a sejtszaporodást, oxidatív stresszt vált ki, ami lipid peroxidációhoz vezet, kimeríti az ATP-szintet és megváltoztatja a Ca++ homeosztázist: mindezeket az elváltozásokat a sejtek számára lehetségesen fatálisnak ítélik meg [27, 28].
A májkárosodás kiértékeléséhez biomarkereket (ALT, AST és ALP), valamint szérum bilirubin szinteket mértünk [29, 30]. A kísérletünk során az acetaminophennek betudható májmérgezettséget megerősítette az olyan biokémiai paraméterek megemelkedett szintje, mint az ALT, AST, ALP, valamint a teljes szérum bilirubin jelentős lecsökkenése, a teljes protein jelentős lecsökkenésével együtt. Ezt azzal a ténnyel lehet magyarázni, hogy a májsejtek olyan gazdaenzimeket tartalmaznak, amelyek egy sor anyagcsere-tevékenységet folytatnak. Az ALT magas koncentrációja volt megtalálható a citoplazmában, és az AST különösen a mitokondriumokban.
Az ALT megemelkedését általában az AST szintjének felemelkedése kíséri, ami alapvetően fontos szerepet játszik az aminosavaknak ketasavakká való átalakulásában [31]. Májmérgezettség esetén a májsejtek szállító funkciójában zavar keletkezik, és ez a plazma membránon keresztüli átszivárgásához vezet [32], ennélfogva ezeknek az enzimeknek az elszivárgása emelkedést okoz ezeknek a szérumszintjében. Az acetaminophen által kiváltott májkárosodás során a megemelkedett ALT és AST szintek a májsejtek integritásában a sejtszivárgás/sejtperforáció indikátorai [33]. Akár szilimarinnal kezelik őket, akár a kivonattal, ez visszafordítja az ALT és AST szintjeinek megnövekedését, annak következtében, hogy a plazma membrán stabilizálódik és kijavítja a sejtkárosodást, melyet az acetaminophen váltott ki [13, 27, 28].
Az alkalin foszfatáz megemelkedett szérumszintje annak tudható be, hogy az epevezeték sejtjeinek szintézise megnövekszik, válaszként arra, hogy megemelkedik az epenyomás és a koleosztázis [27, 28]. A hiper-bilirubinémia a túlzott májkárosodásnak volt betudható, valamint az epevezetékben megnövekedett nyomásnak. Ennek megfelelően tömeges gátlás jelentkezik a konjugációs reakcióban és nem konjugált bilirubint bocsátanak ki a sérült májsejtek. Akár szilimarinnal kezelték előzetesen, akár a kivonattal, ezen a ponton hatékonyan ellenőrzött alkalin foszfatáz tevékenység és bilirubin szint mutat rá, hogy fokozódik a májsejtek kiválasztó mechanizmusa irányában [2, 13, 30].
A teljes proteinszint lecsökkenése azt jelzi, hogy májkárosodás következett be a protein-szintézis jelentős visszaesése következtében. Hipoproteinémiát figyeltek meg acetaminophen adagolása után, de ennek szintje ismét megközelíti a normálisat, ha szilimarinnal vagy kivonattal kezelik.
A lipidoxidációt sugallták az acetaminophen által kiváltott májkárosodásra. A korábbi tanulmányokkal egyetértésben [2, 13] mi is úgy találtuk, hogy az MDA szintje megemelkedik, a SOD, CATA és a GSH szintjei pedig hatásukban lemerülnek, A megemelkedett MDA-szint jelzi ezeknek a mechanizmusoknak a meghibásodását az antioxidáns védelemben [34]. A szilimarinnal vagy a kivonattal való előzetes kezelés jelentősen helyreállítja ezeket a hatásokat. A szervezet védelmi mechanizmusa megelőzi a sejtkárosodást, melyet a szabadgyökök váltottak ki [28]. Ezeket stabilizálják az endogén antioxidáns enzimek, mint pl. a GSH, a SOD és a CATA [35]. Ha nincsen egyensúlyban a ROS termelődése az antioxidáns védelemmel, oxidatív stressz következik be, ami sejtkárosodáshoz vezet. Bármely olyan vegyület, ami antioxidáns tulajdonságokkal bír, meg tudja előzni, illetve enyhíteni tudja az így bekövetkezett károkat [28]. Kísérletünk során A GSH, SOD és CATA szintjének lecsökkenése, melyet acetaminophennel kezelt patkányokon figyeltünk meg, azt jelzi, hogy a szabadgyökök szöveti károsodást okoztak. Ezeknek az antioxidáns enzimeknek a megnövekedett koncentrációja a májszövetekben a szilimarinal vagy kivonattal előkezelt állatokban jelzi a szilimarinnak vagy a kivonatnak az antioxidáns hatását.
A szövetpatológiai leletek megerősítették a biokémiai eredményeket. Azok a patkányok, amelyeket acetaminophennel kezeltek, a májsejtek elhalását mutatták, ami abban mutatkozott meg, hogy eltűntek a sejtmagok, a gyulladásos sejtek pedig összetapadtak. Ez azon szabadgyökök hatásának a következménye lehet, melyek az acetaminophen által kiváltott oxidatív stressz miatt keletkeztek. Ezek a szövetkórtani leletek jelentősen javultak azoknak a patkányoknak az esetében, amelyeket szilimarinnal vagy Adansonia digitata kivonattal kezeltek.
A szilimarin és az Adansonia digitata kivonat hasonló májvédő hatást mutattak jelen kísérlet során. Azok a lehetséges májvédő mechanizmusok, amelyeket a szilimarin kínál, a szilimarin magas fenoltartalmának tudhatók be, melyről úgy tudjuk, hogy hozzájárul az antioxidáns tevékenységhez [2, 6, 7]. Az Adansonia digitata kivonattal kapcsolatos eredményeink egybeesnek a korábbi beszámolókkal, melyeket az Adansonia digitata kémiai kutatásával kapcsolatosan végeztek, és amelyről azt jelentették, hogy összegyűjti a flavonoidokat, terpenoidokat, szteroidokat, aminosavakat, vitaminokat, lipideket és szénhidrátokat [9], míg a szárított gyümölcshús magas koncentrációban tartalmaz szénhidrátokat, tiamint, nikotinsavat és C-vitamint. Ennek megfelelően lehetséges, hogy a kivonat májvédő hatásának mechanizmusa annak az antioxidáns tevékenységnek tudható be, amely C-vitamin és flavonoid tartalmának köszönhető, ezekről pedig köztudott, hogy erős és hatásos szabadgyök-faló hatást fejtenek ki, és ezzel javítják az antioxidáns védelmi rendszer működését. Sőt ezen felül a gyulladáscsökkentő hatású szteroid-tartalom is jelentős szerepet játszhat a kivonat májvédő hatásában.
5. Következtetések
Kísérletünk azt sugallja, hogy az Adansonia digitata kivonatnak jelentős védőhatása van az acetaminophen által kiváltott májmérgezettség ellen. Az Adansonia digitata kivonata úgy fejti ki tevékenységét, hogy javítja a lipid peroxidációt szabadgyökfaló tevékenysége révén, valamint javítja az antioxidáns védelmi rendszer működését.
Elismerések
Ezt a projektet a Deanship of Scientific Research (DSR), a King Abdulaziz Egyetem, Jeddah alapította, Grant no. 166/896/D1435. A szerzők ezért köszönetüket és elismerésüket fejezik ki a DSR-nek a technikai és anyagi támogatásért.
Go to:
Érdekek ütközése
A szerzők kijelentik, hogy nem áll fel érdekütközés ennek a lapnak a megjelentetése révén.
